平板菌落計數(shù)法是如何使用公式計算的？
更新時間：2024-03-15 文章更新于2024-03-15 點擊次數(shù)：5870次
平板菌落計數(shù)法，是種統(tǒng)計物品含菌數(shù)的有效方法。方法如下:將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細(xì)胞，取-定量的稀釋樣液涂布到平板上,經(jīng)過培養(yǎng),每個單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一一個單細(xì)胞;統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。
平板菌落計數(shù)法公式為每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5。
一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。同一稀釋度的三個重復(fù)對照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗不精確。實際工作中同一稀釋度重復(fù)對照平板不能少于三個，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計，減少誤差。由10-4、10-5、10-6三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個連續(xù)稀釋度中的二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。
平板菌落計數(shù)法使用的培養(yǎng)基為結(jié)晶紫中性膽鹽瓊脂培養(yǎng)基，簡稱VRBA。無論是國標(biāo)，還是培養(yǎng)基的使用說明中都明確表示，VRBA是不需要進(jìn)行滅菌的，煮沸2min即可使用。特別指出這一點是因為很多朋友都在問VRBA的滅菌條件，對不滅菌的培養(yǎng)基不信任，害怕出現(xiàn)檢測異常，那是因為這些小伙伴們對其中的原理不清楚。
大腸菌群的定義是在一定培養(yǎng)條件下能夠在發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，因此大腸菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培養(yǎng)基煮沸的過程中，即使有大腸菌群存在也會被殺滅，所以從培養(yǎng)基帶入污染的可能性是沒有的。當(dāng)然盛裝培養(yǎng)基的容器是需要進(jìn)行滅菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一種選擇性的培養(yǎng)基，含有的結(jié)晶紫對革蘭氏陽性菌有比較強(qiáng)的抑制作用而對革蘭氏陰性菌幾乎沒有作用，而且平板培養(yǎng)產(chǎn)生的菌落還需要進(jìn)行復(fù)發(fā)酵的驗證，因此VRBA培養(yǎng)基就不需要進(jìn)行滅菌了。但值得注意的是，VRBA需要現(xiàn)配現(xiàn)用，配制出的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)在3h之內(nèi)使用完畢。
